DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞

【1-2】プラスミドベクターに外来DNAを挿入する場合【高速プロトコール】

プラスミドベクター [25 fmol; pUC118 (3,162 bp) の場合、約50 ng] およびインサートDNA (25～250 fmol) を含むDNA溶液5～10 μlを用意する。^*1
1. のDNA溶液と等量のLigation Ｍix (5～10 μl) を添加し、ピペッティング等により、よく混合する。
25℃で^*2、5分間保温する。
直ちに形質転換を行う場合には、100 μlのコンピテントセルに10 μl^*3 の反応液を加える。

*1	TE Buffer (10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA, pH8.0) などに溶解して下さい。
*2	反応温度を上げると (26℃以上) 環状DNAが形成されにくくなります。高速プロトコールの場合は必ず25℃で反応してください。
*3	大量のDNA溶液をコンピテントセルに加える場合、およびエレクトロポレーションにより形質転換を行う場合はエタノール沈殿によりDNAを回収してから行って下さい。