DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞

【2】T-ベクターへのPCR産物のクローニングの場合

T-ベクター [13～25 fmol; pT7Blue T-Vectorの場合、約25～50 ng] およびインサートDNA (5～250 fmol) を含むDNA溶液^*1 5～10 μlを用意する。
1. のDNA溶液と等量のLigation Ｍix (5～10 μl)を添加し、ピペッティング等により、よく混合する。
16℃で30分間^*2 保温する。
直ちに形質転換を行う場合には、100 μlのコンピテントセルに10 μl^*3 の反応液を加える。

*1	TE Buffer (10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA, pH8.0) などに溶解して下さい。
*2	T-Vectorを用いてPCR産物の Ligationをおこなう場合は、反応時間は 1時間以内にして下さい。長時間反応させると、バックグラウンドが高くなることがあります。
*3	大量のDNA溶液をコンピテントセルに加える場合、およびエレクトロポレーションにより形質転換を行う場合はエタノール沈殿によりDNAを回収してから行ってください。