使用法
- 遺伝子の挿入
プラスミドベクターのクローニングサイトに目的遺伝子のORFを挿入する。アンピシリン耐性遺伝子が搭載されているため、組換え大腸菌を選択できる。
- 細胞への導入
TransITシリーズなどの導入試薬を用いて、プラスミドを細胞に導入する。条件は導入試薬のプロトコールに従っておこなう。
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遺伝子導入細胞の選択
pBApo-CMV Neo DNAはネオマイシン耐性遺伝子を、pBApo-CMV Pur DNAはピュ－ロマイシン耐性遺伝子を搭載しているため、導入細胞を薬剤で選択することが可能である。
薬剤選択はプラスミド導入後24時間以上経過してから開始する。細胞密度が高い場合は適宜希釈して播きなおし、3～4日ごとに薬剤入りの培地を交換する。通常、1～2週間で導入細胞を得ることができる。
細胞によって薬剤に対する感受性は異なるので、あらかじめ使用する細胞に適した濃度を検討する必要がある。G418は500～1,000 μg／ml、ピュ－ロマイシンは1～3 μg／mlが目安になる。
- 発現ユニットの乗せ換え
pBApo-CMV シリーズは、Cla IまたはEcoR Vで消化することにより、発現ユニット（CMVプロモーター＋挿入遺伝子＋ポリAシグナル）を切り出すことができ、容易に他のベクターに乗せ換えることが可能である。
特にアデノウイルスベクター作製キット（Adenovirus Dual Expression Kit；製品コード 6170）は、クローニングサイトとしてCla IおよびSmi Iを持っているため、容易にアデノウイルスベクターに乗せ換えることが可能である。
（EcoR VとSmi Iはともに平滑末端であるため、ライゲ－ションが可能である。）
pBApo-CMVベクターシリーズ
