RT-PCR、リアルタイムRT-PCRを行う場合
1st strand cDNA合成反応液はそのままPCRやリアルタイムPCRの鋳型として使用することができます。その場合、1st strand cDNA合成反応液のPCR系への持込みは、PCR反応液量の1/10量以下となるようにしてください。また、鋳型量がPCRの増幅効率に影響するPCR酵素もありますので、使用するPCR酵素の取扱説明書を参考にして適切な鋳型量を検討することをお勧めします。
RT-PCRにおいて非特異的な増幅が生じたり増幅産物が得られない場合、cDNA合成反応液をRNase H 処理することによって、PCR増幅が改善されることがあります。
推奨するPCR酵素
成功率、特異性を求めるPCR に； Tks Gflex DNA Polymerase
正確なPCR に； PrimeSTAR Max DNA polymerase、PrimeSTAR HS DNA polymerase、PrimeSTAR GXL DNA polymerase
増幅効率の良いPCR に； TaKaRa Ex Taq、TaKaRa Ex Taq HS、PrimeSTAR GXL DNA polymerase
長鎖のPCRに； TaKaRa LA Taq、TaKaRa LA Taq HS、PrimeSTAR GXL DNA polymerase
推奨するリアルタイムPCR試薬
インターカレーター法用；TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)
プローブ法用；Probe qPCR Mix
RT-PCRにおいて非特異的な増幅が生じたり増幅産物が得られない場合、cDNA合成反応液をRNase H 処理することによって、PCR増幅が改善されることがあります。
推奨するPCR酵素
成功率、特異性を求めるPCR に； Tks Gflex DNA Polymerase
正確なPCR に； PrimeSTAR Max DNA polymerase、PrimeSTAR HS DNA polymerase、PrimeSTAR GXL DNA polymerase
増幅効率の良いPCR に； TaKaRa Ex Taq、TaKaRa Ex Taq HS、PrimeSTAR GXL DNA polymerase
長鎖のPCRに； TaKaRa LA Taq、TaKaRa LA Taq HS、PrimeSTAR GXL DNA polymerase
推奨するリアルタイムPCR試薬
インターカレーター法用；TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)
プローブ法用；Probe qPCR Mix
