PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2

PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 の操作方法（製品コード RR055A/B）

  1. 下記に示す反応液を調製する。
    試薬 使用量 最終濃度
    PrimeScript 1 step Enzyme Mix 2 μl
    2× 1 step Buffer 25 μl
    上流Primer（20 μM）*1（センス） 1 μl 0.4 μM
    下流Primer（20 μM）*2（アンチセンス） 1 μl 0.4 μM
    Template RNA X μl*3
    （or Positive Control RNA 1 μl）
    RNase Free dH2O up to 50 μl

    *1 Positive Control RNAの場合、F-1 Primer
    *2 Positive Control RNAの場合、R-1 Primer
    *3 total RNAの場合は1 μg以下を推奨。
  2. 調製したチューブをサーマルサイクラーにセットし、至適プログラムでRT-PCRを行う。
    一般的な反応条件
    （A） PCRを3 stepで行う場合 （B） PCRを2 stepで行う場合
    50℃
    94℃    		 　30 min.
    　2 min.    		 50℃
    94℃    		 　　30 min.
    　　2 min.
    　　　　↓ 　　　↓
    94℃
    55～65℃
    72℃    		 　30 sec.
    　30 sec.
    　1 min./kb
     
    		 25～30 cycles 98℃
    68℃
    		 　　10 sec.
    　　1 min./kb
     
    		 25～30 cycles

    Positive Control RNAの場合*
    50℃
    94℃    		 　　30 min.
    　　2 min.
    　　　↓
    94℃
    60℃
    72℃    		 　　30 sec.
    　　30 sec.
    　　1 min
     
    		 30 cycles

    * コントロール反応では、462 bpの増幅産物が得られる。

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