PrimeSTAR^® GXL DNA Polymerase

PrimeSTAR^® GXL DNA Polymeraseの標準プロトコール

	使用量	最終濃度
5×PrimeSTAR GXL Buffer	10 μl	1×
dNTP Mixture (2.5 mM each)	4 μl	200 μM each
primer 1	10～15 pmol	0.2～0.3 μM^*
primer 2	10～15 pmol	0.2～0.3 μM^*
Template	下記参照
PrimeSTAR GXL DNA Polymerase	1 μl	1.25 U/50 μl
滅菌精製水	up to 50 μl

* 10 kb以上の長鎖を増幅する場合、final conc. 0.2 μMで反応してください。

【推奨鋳型量】

【増幅鎖長が≦10 kbの場合】

　　または

98℃	10 sec.		30 cycles
68℃	1 min./kb

*1 Tm値（下記の式※で計算）が55℃を超える場合はアニーリング温度を60℃に、Tm値が55℃以下の場合はアニーリング温度を55℃に設定してください。
　※　Tm値（℃）＝[（A、Tの数）×2]＋[（G、Cの数）×4]－5
*2 3 step PCRの場合も、伸長温度は68℃に設定してください。

【増幅鎖長が10 kb～30 kbの場合】

98℃	10 sec.		30 cycles
68℃	10 min.

【増幅鎖長が＞30 kbの場合】

98℃	10 sec.		30 cycles
68℃	15 min.

◆ PCR条件の選択

・増幅鎖長が10 kb以下の場合はまず3 step PCRをお試しください。スメアや非特異的増幅が見られる場合はアニーリング温度を上げるか、2 step PCRをお試しください。

・GCリッチな鋳型や10 kb以上の長鎖の増幅には、2 step PCRを推奨します。