Label IT
Q1 Label ITで標識した核酸をハイブリダイゼーションのプローブとして使用する際の変性方法は？
A1 DNAの場合は、熱変性は行わず、必ずキットの添付のMirus Denaturation Buffer D1とMirus Neutralization Buffer N1を用いて変性・中和を行ってください。
この操作により、試薬とDNAの結合が安定化されます。一旦、変性・中和を行った後は、必要に応じて熱変性（～95℃）を行うことが可能です。
RNAの場合は、55～65℃、10分間の熱変性を行ってください。Mirus Denaturation Buffer D1を用いるとRNAが分解されます。
この操作により、試薬とDNAの結合が安定化されます。一旦、変性・中和を行った後は、必要に応じて熱変性（～95℃）を行うことが可能です。
RNAの場合は、55～65℃、10分間の熱変性を行ってください。Mirus Denaturation Buffer D1を用いるとRNAが分解されます。
Q2 Label IT Digoxin Labeling Kitで標識された核酸は、市販の抗DIG抗体などと反応するのか？
A2 Boehringer Mannheim社の抗DIG抗体、Pierce社の抗digoxin抗体と問題なく反応することを確認しています。
Q3 Label IT で標識が入る個数は? また、標識効率を上げるにはどうすればよいか？
A3 スタンダードプロトコールは種々のアプリケーションに最適な効率で標識されるように設定されており、20～60塩基に1個の割合でラベルが入ります。30塩基以下の核酸を標識する際は、Label IT Reagent：核酸＝3 μl：1 μg（通常は1 μl：1 μg）にしてください。そうすることで、約10塩基に1個の割合でラベルが入ります。
Q4 Label IT でラベルしたプローブをハイブリダイゼーションに用いた後、メンブランをリプローブできるか？
A4 メンブランをリプローブすることは可能です。通常、メンブランを0.5％ SDS存在下60℃でインキュベートすることでプローブが剥がれます。ただしリプローブする場合は、ハイブリダイゼーション後、プローブを剥がすまでメンブランを乾燥させないでください。
