Fruit-mate™ for RNA Purification

Fruit-mate™ for RNA Purification（製品コード 9192）による前処理効果
RNAiso Plusとの組合せ

100 mg以上の植物組織を乳鉢にいれて、液体窒素中で乳棒を用いて破砕する。
破砕した植物組織100 mgを液体窒素で凍らした1.5 ml RNaseフリーチューブに入れ、Fruit-mateを1 ml添加し、破砕物とFruit-mateをよく混和する。ただちに、12,000×gで5分間、4℃にて遠心する。上清を2つの1.5 ml RNaseフリーのチューブに等量ずつ分けて移す。
各チューブに0.5 mlのRNAiso Plus（Fruit-mateと等量）を加える。混和して室温で5分おく。
0.2 mlのクロロホルムを加えて激しく転倒混和し室温で5分おく。12,000×gで15分間、4℃にて遠心する。遠心後、赤い下層の有機溶媒層、中間層、色のない上層の水層に分かれる。RNAは水層に残る。
中間層に触れないように十分に注意して、水層を新しいチューブに移す。
水層と等量のイソプロパノールを加え、室温で10分おく。12,000×gで10分間、4℃にて遠心する。RNAはゲル状にチューブのサイドから底に沈殿する。
上清を除き、RNAペレットを少なくとも1 mlの75％エタノールで1回洗う。7,500×gで5分間、4℃にて遠心する。
沈殿を残して上清を取り除く。
得られた沈殿を室温で乾燥させた後、適量のRNase-free waterで溶解する。
注意）RNAが溶解しにくくなることがありますので、遠心乾燥や加熱乾燥をしないでください。

下記の植物組織から、上記方法に従ってtotal RNA抽出を行い、Fruit-mateによる処理を行わなかった場合と抽出効果を比較した。