増幅鎖長の確認（2ステップRT-PCR）
PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit（製品コード R023A）
ヒト心臓由来total RNAを鋳型として、Dystrophin遺伝子の様々な長さの領域を2ステップRT-PCRで増幅しました。
【方法】
total RNA 1 μg/20 μl反応系で逆転写反応（oligo dT Primerを使用）を行い、そのうち5 μlを鋳型として50 μl反応系（total RNA 250 ng相当/50 μl PCR反応系）で下記条件のPCRを行った。
PCR条件：
PCR条件：
| 6 kb 以下 | 8 kb 以上 | ||||||
| 98℃ | 10 sec. |
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30 cycles | 98℃ | 10sec. |
|
30 cycles |
| 60 or 55℃ | 15 sec. | 68℃ | 1 min./kb | ||||
| 68℃ | 1 min./kb | ||||||
【結果】
13.5 kbまで良好な伸長と増幅が確認できた。
