SimplePrep™ reagent for DNA

Q1 リアルタイムPCR用のテンプレートとして使用できるか？
A1 本試薬を用いたDNA抽出液で、インターカレーター法およびサイクリングプローブ法での検出を確認しています。ただし、本キットで調製したDNA抽出液を用いた定量実験は行えません。定性目的の実験にご使用ください。リアルタイムPCRには、標準プロトコールならびに簡易プロトコールで調製した抽出液共に、反応系に対し1/10量まで添加可能です。

Q2 試料の最適処理量は？
A2 以下の表に示します。

試料	推奨量	使用可能量
マウス肝臓	10 mgまで	1～20 mg
マウス腎臓	10 mgまで	1～20 mg
マウス尻尾	3 mm（約5 mg）	2～4 mm（約 2～10 mg）
ヒト爪	5 mg	～5 mg
（EDTA血）	（2 μl）	（1～5 μl）

Q3 増幅鎖長はどのくらいまで可能か？
A3 TaKaRa Ex Taq Hot Start Version（製品コード RR006A）、またはPrimeSTAR GXL DNA Polymerase（製品コード R050A）を用いて、4 kbまでの増幅を確認しています。（サンプル：マウスの尾由来DNA抽出液、ターゲット：ヘモグロビン）サンプルの種類および増幅ターゲットなどにより増幅可能なサイズは異なりますので、ご注意ください。

Q4 血液よりDNA抽出液を調製できるか？
A4 下記の方法により、EDTA血からの調製が可能でした。

1. 試薬Mix（標準プロトコール44 μl、簡易プロトコール64 μl）にEDTA血を2 μl添加し、混和後に熱処理を行う。
2. 標準プロトコールの場合は、インキュベート後に滅菌精製水を80 μl加え、ピペットで緩やかに混和する。
3. 遠心操作を行わずに、そのままPCRの鋳型として使用する。
   ＊ 血液からのDNA抽出液のPCRには、PrimeSTAR GXL DNA Polymerase（製品コード R050A）の使用をお勧めします。

Q5 爪からDNA抽出液を調製できるか？
A5 爪は個体差が大きく、サンプルにより抽出効率もかなり異なります。調製時に爪を細かく切ったものを使用いただくことで、抽出量が上がることがあります。通常、爪から調製した抽出液に含まれるDNAは微量であるため、リアルタイムPCRでは増幅が確認できますが、通常のPCRでは増幅が確認できない場合があります。通常のPCRの場合は、Cycle数を40 cycles程度に増やしてお試しください。