操作方法
Yeast Processing Reagent (for total RNA preparation)（製品コード 9089）
- 2～5×107個（1倍体Saccharomyces cerevisiaeの場合）の酵母菌体*を含む培養液を遠心チューブに分注し、10,000 rpm、4℃で2分間遠心する。
* 対数増殖期にある新鮮な酵母菌体を使用してください。
* 長時間培養した酵母菌体や凍結保存酵母菌体ペレットからもRNA調製は可能ですが、収量は低下する場合があります。また、培養状態や凍結状態、保存期間により得られるRNAの純度や質の低下が生じる場合があります。凍結状態での長期保存は推奨できません。
* 凍結酵母菌体ペレットを用いる場合は、凍結ペレットを氷上に取り出し素早く下記操作5.から行ってください。
- 上清をマイクロピペット等で丁寧にできるだけ取り除く。
- 菌体沈殿に氷冷滅菌水を1 ml加え、ピペッティングにより懸濁した後、10,000 rpm、4℃で2分間遠心する。
- 上清をマイクロピペット等で丁寧にできるだけ取り除く。
- Yeast Processing Bufferを80 μl加え、ピペッティングにより穏やかに混合する。
- Yeast Processing Enzyme Solutionを8 μl加え、ピペッティングにより穏やかに混合する。
- 30℃で30分～1時間*、10～20分毎に指で軽く弾いて（タッピング）混合しながらインキュベートする。
* 対数増殖期の新鮮な培養酵母菌体を用いた場合、37℃で10分間のインキュベートでもRNA調製は可能です。しかし、RNA収量は低下する場合があります。
* 酵母（属）や培養条件、菌体数によって最適な反応時間が異なる場合があります。その場合は予め処理時間の最適化をお勧めします。
* 凍結酵母菌体ペレットを用いる場合、反応条件は30℃、10～30分間としてください。
- 7.で得られた酵母菌体反応液よりNucleoSpin RNAまたはRNAiso Plusを用いてtotal RNAを調製する。
NucleoSpin RNAおよびRNAiso Plusのプロトコールは、各説明書を一部変更してご使用ください。変更部分は、取扱説明書のV.操作フロー中の下線部分です。基本的なプロトコールの詳細は各説明書の下記の対象項もご参照ください。
・NucleoSpin RNA： 5 Protocols、section 5.1 のstep 2-9
・RNAiso Plus： VI. 実験例およびVII. RNA抽出のフローチャート
本製品は、NucleoSpin RNAまたはRNAiso Plusと組み合わせてご使用ください。
他のRNA抽出試薬との組み合わせについては、適合性を確認しておりません。
