TB Green^® Premix Ex Taq™ (Tli RNaseH Plus)

＜1反応あたり＞

試薬	使用量	最終濃度
TB Green Premix Ex Taq（2×）	12.5 μl	1×
PCR Forward Primer（10 μM）	0.5 μl	0.2 μM	*1
PCR Reverse Primer（10 μM）	0.5 μl	0.2 μM	*1
template（＜100 ng）*2	2 μl
滅菌精製水	9.5 μl
total	25 μl

*1	最終primer濃度は0.2 μMで良い結果が得られる場合が多いが、反応性に問題があるときは0.1～1.0 μMの範囲で最適な濃度を検討すると良い。
*2	template溶液中に存在するターゲットのコピー数により異なる。段階希釈して適当な添加量を検討する。DNA template 100 ng以下を用いることが望ましい。また、RT-PCRでcDNA（RT反応液）をtemplateとして添加する場合は、添加量をPCR反応液容量の10％以下とする。

PCR反応は、下記のシャトルPCR標準プロトコールで行うことをお勧めします。
まずはこのプロトコールを試し、必要に応じてPCR条件を至適化してください。
Tm値が低めのプライマーなど、シャトルPCRでの反応が難しい場合には、3ステップPCRを行います。（PCR条件を至適化する場合は、「実験条件の選び方」をご参照ください。）

シャトルPCR標準プロトコール

※使用上の注意 本製品に使用しているTaKaRa Ex Taq HSはポリメラーゼ活性を抑制する抗Taq抗体を利用したホットスタートPCR用酵素です。他社の化学修飾タイプのホットスタートPCR酵素で必要なPCR反応前の95℃（5～）15分の活性化ステップは行わないでください。必要以上の熱処理を加えると酵素活性が低下し、増幅効率、定量精度に影響を及ぼす傾向があります。 PCR反応前に鋳型の初期変性を行う場合でも、通常95℃ 30秒で充分です。

Smart Cycler Systemでの解析方法は、Smart Cycler System取扱説明書を参照してください。