マウス培養細胞上清中のGla型オステオカルシン測定例
マウス頭蓋骨から樹立された骨芽様細胞MC3T3E1の培養において、産生されるGla型オステオカルシンを定量モニタリングした。
＜結果＞
本実験では、細胞に対する培地量を多めに設定し、途中の培地交換を実施せずにモニタリングを続けた。24日以降については、培地交換を実施したため、データ取得していない。
10％FCSを含む培地を使用しても、培養上清中のGla型オステオカルシン産生が確認できた。
培養開始日および30日目にアルカリ性ホスファターゼ染色を行った。
アルカリ性ホスファターゼ染色には、TRACP & ALP double-stain Kit（製品コード MK300）を用いた。
| 培養条件 | DMEM、10％FCS、ストレプトマイシン／ペニシリン含有 |
| 細胞数 | 播種時 1×106細胞／10 cmシャーレ 1枚 70％飽和培養から100％飽和へ移行させる。 |
| 使用培地量 | 30 ml／10 cmシャーレ |
| 測定条件 | 0.5 mlずつ培養上清を経日的サンプリング、原液で測定 |
| 培養日数（day） | Gla-OC濃度（ng/ml） |
| Blank（培地） 1 5 10 20 22 24 |
0.000 0.559 0.515 0.863 3.500 4.364 3.856 |
＜結果＞
本実験では、細胞に対する培地量を多めに設定し、途中の培地交換を実施せずにモニタリングを続けた。24日以降については、培地交換を実施したため、データ取得していない。
10％FCSを含む培地を使用しても、培養上清中のGla型オステオカルシン産生が確認できた。
培養開始日および30日目にアルカリ性ホスファターゼ染色を行った。
アルカリ性ホスファターゼ染色には、TRACP & ALP double-stain Kit（製品コード MK300）を用いた。
 培養0日目 |
 培養30日目 |
