エピジェネティクス

バイサルファイト処理後のHeLaゲノムDNAを鋳型として、TaKaRa EpiTaq HSほか各社PCR酵素で増幅した。
（処理済HeLaゲノムDNA 100 ng/50 μl反応系） 反応条件は、下記の通り。

バイサルファイト処理	：	MethylEasy Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit（終売）
ターゲット	：	CDKN2A、BRCA1 gene 上流のCpG アイランド領域
増幅サイズ	：	144 bp (CDKN2A)、1,017 bp (BRCA1)

＜反応液組成＞

	液量	終濃度
バイサルファイト処理HeLa ゲノムDNA（50 ng/μl）	2 μl	100 ng / 50 μl
10×EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free)	5 μl	1 ×
25 mM MgCl2	5 μl	2.5 mM
dNTP Mixture（各2.5 mM）	6 μl	0.3 mM
Sense Primer（20 μM）	1 μl	0.4 μM
Antisense Primer（20 μM）	1 μl	0.4 μM
TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl）	0.25 μl	1.25 U／50 μl
滅菌蒸留水	up to 50 μl

＜PCR条件＞

98℃	10 sec.		40 cycles
55℃	30 sec.
72℃	［30 sec.（144 bp）or 1 min.（1,017 bp）］

（TaKaRa EpiTaq HS以外は各社反応条件に従い実施した。）

TaKaRa EpiTaq HSで最も良好な増幅が確認できた。