| 1. 血液サンプルの溶解 |
 | 血液200 μl*1とProteinase K溶液*2 25 μlを、マイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）に加える。
Buffer B3 200 μlを加え、激しくボルテックスする（10～20秒）。
注意：このステップで激しくボルテックスすることが、高純度、高収量のDNAを得るために重要です。
70℃で15分間、インキュベートする。
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| 2. エタノールの添加 |
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エタノール（96～100%） 210 μlを添加し、よく混合する。 |
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| 3. カラムへの吸着 |  |
NuleoSpin Blood ColumnをCollection Tubeにセットする。
2の溶液をカラムに添加し、11,000×g、1分間遠心する。
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※遠心後、サンプルがカラムに残っている場合、遠心回転数をあげて（15,000×g未満）、遠心を繰り返す。
ろ液、コレクションチューブを捨てる。 |
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| 4. メンブレンの洗浄 |
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1回目の洗浄
NuleoSpin Blood Columnを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。
Buffer BW 500 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液、コレクションチューブを捨てる。 | |
2回目の洗浄
Buffer B5*3 600 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。 | | |
| 5. メンブレンの乾燥 |
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11,000×gで1分間遠心する。 | |
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| 6. DNAの溶出 |
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カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。
70℃に温めたBuffer BE 100 μlをシリカメンブレンの中央へ添加し、室温で1分間インキュベートした後、11,000×gで1分間遠心する。
溶出したDNAは4℃、長期保存の場合は、－20℃で保存する。（凍結融解はできるだけ繰り返さない。）
Buffer BEの組成：5 mM Tris-HCl、pH8.5 |
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