NucleoBond^® HMW DNA

培養細胞
10⁷個までの細胞を50 mlチューブで遠心により集める。

動物組織
300 mgまでの組織を細切れにした後、50 mlのチューブに入れる。

バクテリア
50 mlのチューブに20 mgのバクテリアとBuffer H1 1 mlを加えて懸濁する。
この懸濁液にリゾチーム溶液^＊1100 μlを加えて混合し、37℃で1時間インキュベートする。

酵母
50 mlのチューブに50 mgの酵母とBuffer H1 1 mlを加えて懸濁する。
この懸濁液にzymolyase溶液^＊2100 μlを加えて混合し、37℃で2時間インキュベートする。

液体試料
2 ml分の液体試料を50 mlのチューブに入れる。

Buffer H1 5 mlとLiquid Proteinase K 200 μlを加える（リゾチーム処理、zymolyase処理
を行った場合にはBuffer H1を加えて最終液量を5 mlにする）。Vortexで5秒間混合する。

時々混合しながら50℃で30分間インキュベートして溶解させる。

Liquid RNase A 100 μlを添加して、転倒混和を行う。
室温で5分間インキュベートする。

カラムフィルターを挿入したNucleoBond HMW ColumnをBuffer H2 12 mlで平衡化する。

4の溶液にBuffer H2 10 mlを加えて転倒混和する。

Buffer H3 6 mlをカラムフィルターの縁から加え、自然落下で通す。
カラムが空になったら、カラムフィルターを取り除く。

Buffer H4 12 ml添加し、自然落下でカラムを空にする。

カラムの下に50 mlチューブをセットして、Buffer H5 5 mlをカラムに加え、DNAを溶出させる。

3.5 mlイソプロパノールを加えて、10回転倒混和を行う。
4,500×g以上室温で10分間遠心して、DNAを沈殿させる。
上清を注意深く除去する。

70％エタノール2 mlを加え、4,500×g以上で室温5分間遠心した後、
注意深く上清を完全に取り除く。エタノールの液滴が見えなくなるまで、
室温で風乾する。（過剰な乾燥は避ける）

　

150 μlのBuffer HEを加えて、ゆっくり揺らしながら溶解させる（完全に溶解させるためには
終夜程度の時間をかけることが必要）。以後の実験には広口のピペットチップを使用することが
望ましい。