| 1. サンプルの準備 |  | 100 mgの植物組織を用意する。液体窒素を加え、凍結しながら乳鉢で粉状にする、などの細分化処理を行う。
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| 2. サンプルの溶解 |  | Buffer RA1 350 μl（2-MEまたは1 M（～2 M）DTT 3.5 μlを添加）を植物組織に添加し、均一にホモジナイズする。
（サンプルにBuffer RA1を加えてうまく溶解しない場合は、代わりにBuffer RAPを用いて溶解する。）
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| 3. ライセートのろ過 |  | NucleoSpin Filter（紫のリング）をCollection Tube（2 ml）にセットする。
2のライセートをNucleoSpin Filterに加え、11,000×g、1分間で遠心する。
NucleoSpin Filterを取り除き、ろ液を別の1.5 mlチューブにうつす。*1
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| 4. エタノールの添加 |
| ろ液に70％エタノール 350 μlを添加し、よく混合する。
（スピンダウンは避ける。スピンダウンした場合は沈殿物も全て5のカラムに添加する。） |
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| 5. カラムへの吸着 |  | NucleoSpin RNA Plant Column（水色のリング）を用意する。
4の溶液をカラムに添加し、11,000×g、30秒間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。 | |
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| 6. メンブレンの脱塩 |  | MDB 350 μlをカラムに添加し、11,000×g、1分間で遠心する。 | |
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| 7. DNase処理 |  | rDNase溶液*2 10 μlとReaction Buffer for rDNase 90 μlを混合し、DNase reaction mixtureを調製する。
DNase reaction mixture 95 μlをシリカメンブレンの中央へ直接添加し、室温（18～25℃）で15分間インキュベートする。 |
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| 8. メンブレンの洗浄 |  | 1回目の洗浄
Buffer RAW2 200 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。 | |
2回目の洗浄
Buffer RA3*3 700 μl*4 をカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにセットする。 | |
3回目の洗浄
Buffer RA3*3 250 μlをカラムに添加し、11,000×gで2分間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（1.5 ml）にセットする。 | |
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| 9. RNAの溶出 |  | RNase-free H2O 60 μlをカラムに加え、11,000×gで1分間遠心する。
溶出したRNA溶液は、－20℃または－70℃で保存する。 | |
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