アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターによる遺伝子導入　参考文献

AAVpro Helper Free System (AAV2)（製品コード 6230）に含まれるAAV Extraction Solution AおよびBを使用することで、簡便に効率よくAAV2ベクターを抽出することができる。以下に参考データを示す。

【 凍結融解法との比較（1）　＜力価＞ 】
AAVpro Helper Free System (AAV2)とpAAV-ZsGreen1 Vector（製品コード 6231）を用いてZsGreen1を搭載したAAV2ベクターを産生するHEK293細胞を作製した。得られた細胞からAAV Extraction Solutionを使用してAAV2ベクターを抽出した。比較対照として、凍結融解法によりAAV2ベクターを抽出した。得られた抽出液はリアルタイムPCRによるベクターゲノム定量およびHT1080への感染実験を行い、その力価を評価した（図1、図2）。その結果、AAV Extraction Solution使用時の方が明らかに力価が高いことが示された。

AES：AAV Extraction Solution F/T：凍結融解法 ＊ vg：Vector Genome

図1．AAV Extraction Solutionを用いたAAV2抽出効率　＜ベクターゲノム定量＞

AES：AAV Extraction Solution F/T：凍結融解法

図2．AAV Extraction Solutionを用いたAAV2抽出効率　＜HT1080への感染力価＞

【 凍結融解法との比較（2）　＜不純物＞ 】
AAVpro Helper Free System (AAV2)を用いて目的遺伝子を搭載しないAAV2ベクターを産生するHEK293細胞を作製した。得られた細胞からAAV Extraction Solutionを使用してAAV2ベクターの抽出を行った。比較対照として、凍結融解法によりAAV2ベクターを抽出した。得られたウイルス液はリアルタイムPCRによるベクターゲノム定量を行った後、1×10⁹ vg分のウイルス液をSDS-PAGEに供して、ウイルス液中に混入している不純タンパク質を評価した（図3）。さらにインターカレーター法により、ウイルス液中に混入している2本鎖DNAの定量を行った（図4）。その結果、AAV Extraction Solutionを使用して得られたウイルス液は、凍結融解法と比較して明らかに不純タンパク質と2本鎖DNAの混入が少ないことが示された。

AES：AAV Extraction Solution F/T：凍結融解法 (1×109 vg / lane)

図3．AAV Extraction Solutionを用いて抽出したAAV2溶液のSDS-PAGE


図4．AAV Extraction Solutionを用いて抽出したAAV2溶液中の2本鎖DNA混入量