AcGFP1-LC3安定発現C2C12細胞におけるオートファジーの検出
pAutophagSENSE Vector（製品コード 632583）
方法
- 安定株の取得：C2C12細胞にAcGFP1-LC3発現ベクターを導入後、翌日に発現を確認した。その後、細胞を回収し十分に希釈してdishに播種した。薬剤選択を開始し、1～2週間後に各細胞のクローン（Stable clone）を出現させ、更に適度なクローンをpick upし、拡大培養を行った。
- 飢餓誘導：Dish（35 mm, glass bottom）に細胞を播種。翌日、通常培地（10%FBS/DMEM）を除去しPBSでwashし、飢餓培地（血清フリー＆アミノ酸フリーDMEM）に交換した。
- 飢餓誘導後、ただちに0分、30分、60分で経時観察を行い蛍光顕微鏡画像取得した（CCDカメラ、露光2秒）。
結果
● 蛍光顕微鏡画像
