核酸抽出

NucleoSpin^® Plasmid EasyPure（製品コード 740727.10，740727.50，740727.250）

	試薬の準備	Buffer A1（＋RNase A）＊1, Buffer AQ＊2が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
1.	培養液の調製 集菌	大腸菌の培養液2～10 mlを12,000×gで30秒間遠心し、上清をできるだけ除去する。
2.	菌の溶解	細胞ペレットにBuffer A1（＋RNase A)＊1150 μlを加え、ボルテックスまたはピペッテイングで完全に溶解する。 Buffer A2＊3 250 μｌを加え、チューブを5回反転して穏やかに混合する。ボルテックスはしてはならない。 2分間またはライセートが清澄化するまで室温で静置する。 Buffer A3 350 μｌを加え、LyseControlの青色が完全に無色になるまでチューブを反転して穏やかに混合する。ボルテックスはしてはならない。
3.	ライセートの清澄化	2の溶液を12,000×g、3分間室温で遠心する。
4.	カラムへの吸着	NucleoSpin Plasmid EasyPure ColumnをCollection Tube (2 ml)にセットする。 3の上清を最大750 μlをカラムに添加し、1,000～2,000×g、30秒間遠心する。 ろ液を捨て、カラムを同じCollection Tubeにセットする。
5.	メンブレンの洗浄・乾燥	Buffer AQ＊2 450 μlをカラムに添加し、12,000×gで1分間遠心する。 Collection Tubeからカラムの先がろ液に触れないように、カラムを注意深くはずす。 （エタノールのキャリーオーバーを防ぎたい場合は37℃で10～15分間インキュベートする。）
6.	DNAの溶出	カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。 Buffer AE 50 μlを添加し、室温で1分間インキュベートした後、12,000×gで1分間遠心する。 溶出液をプラスミド溶液として保存する。 Buffer AEの組成：5 mM Tris-HCl、pH8.5

＊1	Buffer A1（＋RNase A)の調製法 Liqid RNase A全量をBuffer A1のボトルに移す。 RNase Aを添加したBuffer A1は、4℃で6ヵ月安定である。
＊2	Buffer AQの調製法 Wash Buffer AQ（concentrate）に、4倍量のエタノール（96～100%）を添加する。
＊3	Buffer A2に沈殿が生じている場合は、30～40℃で数分温めて沈殿を完全に溶解ししてください。 溶解後、Buffer A2を室温（18～25℃）に戻してから使用してください。

＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書をご確認ください。