| 試薬の準備 |
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rDNase溶液＊1，Buffer MW2＊2が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
Buffer MLFに沈殿が生じていないことを確認する＊3。
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| 1．サンプルの準備 |
| | ホルマリン固定パラフィン包埋切片＊4を用意し、1.5 mlのマイクロチューブ（各自で用意）に入れる。
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| 2. 脱パラフィン処理 |
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1 mlのParaffin Dissolverを添加し、56℃で5分保温する。
すぐにVortexで激しく混合し、パラフィンを完全に溶解する。 |  |
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16,000×gで2分間遠心する。
Buffer MLF＊3 170 μlを添加する。絶対に混合しない。そのまま16,000×gで2分間遠心し、Paraffin Dissolver（上層）をピペットで取り除く。
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| 3. サンプルの溶解 |
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Method 3A
15 μlのProteinase Kを添加し、ピペッティングなどで緩やかに混合する。
56℃で15分間保温する＊5。
Buffer MKA 15 μlを添加し、素早く混合する。
氷上で5分間静置した後、16,000×gで5分間遠心する。上清を別の1.5 mlマイクロチューブ（各自で用意）へ移し、80℃で正確に15分間保温する。（脱クロスリンク） |
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Method 3B
15 μlのProteinase Kを添加し、ピペッティングなどで緩やかに混合する。
56℃で90分間保温する＊5。
Buffer MKA 15 μlを添加し、素早く混合する。
氷上で5分間静置した後、16,000×gで5分間遠心し、上清を別の1.5 mlマイクロチューブ（各自で用意）へ移す。
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| 4. Bufferの添加 |
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Buffer MX 500 μlを添加し、vortexで5秒間×2回混合する。
室温で1分間静置する。
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| 5. カラムへの吸着 |
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NucleoSpin RNA ColumnをCollection Tube（2 ml）にセットする。
4の溶液をカラムに添加し、16,000×g、15秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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| 6. メンブレンの洗浄 |
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1回目の洗浄
Buffer MW2＊2 700 μlをカラムに添加し、16,000×gで15秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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2回目の洗浄
Buffer MW2＊2 250 μl をカラムに添加し16,000×gで1分間遠心し、メンブレンを乾燥させる。
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7. DNase処理
（オプション） |
 | rDNase溶液＊1 50 μlを直接NucleoSpin RNA Columnのメンブレンに添加する。
室温で15分間保温する。
Buffer MX 100 μlをカラムに添加し、1分間室温で静置する。
16,000×gで15秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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1回目の洗浄
Buffer MW2＊2 700 μlをカラムに添加し、16,000×gで15秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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2回目の洗浄
Buffer MW2＊2 250 μl をカラムに添加し、16,000×gで1分間遠心しメンブレンを乾燥させる。
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| 8. RNAの溶出 |
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NucleoSpin RNA Columnを新しいCollection Tube（1.5 ml）にセットする。
RNase-free H2O 30～50 μlをカラムのメンブレンに加え、室温で1分間静置する。
16,000×gで1分間遠心する。
溶出したRNA溶液は、－20℃または－70℃で保存する。
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