| 試薬の調製 |
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Buffer SW2＊1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
Buffer SL1, Buffer SL2に沈殿が生じていないことを確認する＊2。
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| 1．サンプルの準備 |
 | セラミックビーズ入りのMN Bead Tubeにサンプル250～500 mgを加える。決して1 mlのマークを超えてサンプルを加えないこと。
Buffer SL1またはBuffer SL2を700 μl加える。＊3 ＊4
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| 2. サンプル溶解条件の調整 |
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Enhancer SXを150 μl添加する＊5。 |
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| 3. サンプルの溶解 |
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MN Bead Tubeを水平に倒して、vortexで室温5分間、最高速度で激しく混合する。
他の破砕装置を使用する場合には、装置のマニュアルに従う。
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| 4. 混入物の沈殿 |
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MN Bead Tubeを11 ,000×g、2分間遠心して生じた泡を取り除く（ここで泡を取り除いた上清を別の1.5 ml tubeに移して以下の作業を行ってもよい）。
Buffer SL3を150 μl加えて、vortexで5秒間混合する。
氷上で5分間静置する。
11,000×g、1分間遠心する。 |
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| 5. 溶解液のろ過 |
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NucleoSpin Inhibitor Removal Column（赤色リング）をCollection Tube（2 ml：蓋付）にセットする。
4の上清700 μlをカラムに加え、11,000×g、1分間遠心してろ液を回収する。
サンプルの水分含量が多く、4の上清が700 μlを超える場合にはNucleoSpin Inhibitor Removal Columnを別のマイクロチューブ（各自で用意）にセットし、残りの上清をカラムに加えて11,000×g、1分間遠心し、ろ液を回収して、1回目のろ液と混合する。
ろ液に沈殿が見られる場合は上清を別のマイクロチューブ（各自で用意）に移す。
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| 6. Bufferの添加 |
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5のろ液にBuffer SB 250 μlを添加し、vortexで5秒間混合する。
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| 7. カラムへの吸着 |
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NucleoSpin Soil Column（緑色リング）をCollection Tube（2 ml：蓋なし）にセットする。
6の溶液550 μlをカラムに加えて、11,000×g、1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
6の溶液の残りをカラムに添加し、11,000×g、1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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| 8. メンブレンの洗浄 |
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1回目の洗浄
Buffer SB 500 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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2回目の洗浄
Buffer SW1、550 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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3回目の洗浄
Buffer SW2、650 μlをカラムに添加し、vortexで2秒間撹拌する。
11,000×gで30秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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4回目の洗浄
Buffer SW2、650 μlをカラムに添加し、vortexで2秒間撹拌する。その後、11,000×gで30秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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| 9. メンブレンの乾燥 |
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8のカラムをさらに11,000×gで2分間遠心する。カラムをCollection Tubeのろ液に触れないよう取り出す。
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| 10. DNAの溶出 |
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カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。
Buffer SE 30～100 μlを添加し、蓋 を閉めずに室温で1分間インキュベートする。
蓋 を閉めて、11,000×gで30秒間遠心し、DNAを溶出させる。
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