| 試薬の準備 |
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Buffer PW2＊1、RNaseA＊2溶液が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
Buffer PL1, Buffer PL2に沈殿が生じていないことを確認する＊3。
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| 1．サンプルの準備 |
 | 湿重量100 mg（乾燥試料であれば20 mg）までの植物組織を用意する。液体窒素を加え、凍結しながら乳鉢で粉状にする、またはホモジナイザー処理などで細分化を行う。
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| 2. サンプルの溶解 |
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2a. Buffer PL1を使用する場合
破砕したサンプルをマイクロチューブに移し、 Buffer PL1＊3を400 μlを加えて、vortexで充分に混合する＊5。
RNaseA溶液＊2 10 μlを加えて混合し、65℃で10分間保温する。
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2b. Buffer PL2を使用する場合
破砕したサンプルをマイクロチューブに移し、Buffer PL2＊3を300 μlを加えて、vortexで充分に混合する＊6。
RNaseA溶液＊2 10 μlを加えて混合し、65℃で10分間保温する。
Buffer PL3を75 μl加えて混合し、氷上で5分間静置してSDSを沈殿させる。
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| 3. 溶解液のろ過 |
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NucleoSpin Filter（青紫色リング）をCollection Tube（2 ml）にセットする。
2のサンプル溶解液をカラムに加えて、11,000×g、2分間遠心する。
ろ液に沈殿が見られる場合、上清を別のマイクロチューブに移す（各自で用意）。
あるいは、サンプル溶解液を11,000×g、5分間遠心して上清を回収し、NucleoSpin Filterに添加し上記のようにろ過してもよい。
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| 4. Bufferの添加 |
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3のろ液にBuffer PC 450 μlを添加し、ピペッティングやvortexで充分に混合する。
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| 5. カラムへの吸着 |
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NucleoSpin Plant II Column（緑色リング）を新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。
4の溶液700 μlをカラムに加えて、11,000×g、1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
4の溶液が700 μlより多い場合は、この作業を繰り返す。
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| 6. メンブレンの洗浄 |
 | 1回目の洗浄
Buffer PW1、400 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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2回目の洗浄
Buffer PW2＊1、700 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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3回目の洗浄
Buffer PW2＊1、200 μlをカラムに添加し、11,000×gで2分間遠心してカラムを乾燥させる。
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| 7. DNAの溶出 |
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カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。
65℃に温めたBuffer PE 50 μl＊7を添加し、65℃で5分間インキュベートする。
11,000×gで1分間遠心し、DNAを溶出させる。
さらに65℃に温めたBuffer PE 50 μl＊7を添加し、この作業を繰り返す。
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