In-Fusion® HD Cloning KitとA社同等品の比較実験（TB USA社取得データ）
方法
- クローニングベクターにはBamH Iで切断したpUC19を使用した。
- 反応条件は各社推奨のプロトコールに従った。
- A社製品の反応時間は15～60分の範囲のため、マルチクローニングの場合のみ60分の反応条件も行った。
- 形質転換にはクロンテックの「Stellar Competent Cells」を使用した。
- 「目的クローンの割合」は、「Vector ＋ Insert」で出現したコロニーから26個をピックアップしてシーケンスを行い、正しい配列のコロニー数から算出した。
(1) マルチクローニングの場合
2.7 kbのベクターに、MBP（1.1 kb）、PROF12（0.7 kb）、AcGFP（0.7 kb）の3種類のインサートを同時にクローニングするマルチクローニングを行った。
・目的クローンの割合も、In-Fusion Kitが高かった。
| In-Fusion HD Cloning | A社 | ||
|---|---|---|---|
| 反応条件 | 50℃、 15分 | 50℃、 15分 | 50℃、 60分 |
| Vector ＋ Insert | 89コロニー | 111コロニー | 392コロニー |
| Negative Control （no insert） | 1コロニー | 39コロニー | 78コロニー |
| 目的クローンの割合 | 100％ （26/26） | 19％ （5/26） | 73％ （19/26） |
＜結果＞
・In-Fusion Kitに比べA社キットが、Negative Controlのコロニー出現数が圧倒的に多かった。・目的クローンの割合も、In-Fusion Kitが高かった。
(2) シングルクローニングの場合
2.7 kbのベクターに、1種類のフラグメント（MBP；1.1 kb）のシングルクローニングを行った。
・目的クローンの割合には大きな差がみられなかった。
| In-Fusion HD Cloning | A社 | |
|---|---|---|
| 反応条件 | 50℃、15分 | 50℃、15分 |
| Vector ＋ Insert | 635コロニー | 401コロニー |
| Negative Control （no insert） | 1コロニー | 39コロニー |
| 目的クローンの割合 | 100％（26/26） | 96％（25/26） |
＜結果＞
・In-Fusion Kitに比べA社キットが、Negative Controlのコロニー出現数が多かった。・目的クローンの割合には大きな差がみられなかった。
まとめ
In-Fusion Kitの方がバックグラウンドが低く、正確性の高いクローニング結果が得られた。
