食品汚染菌モデルでの検出評価
EHEC (O antigens) PCR Typing Kit（製品コード RR133A）
食品培養液に含まれる夾雑物存在下で調製したテンプレートDNA を用いて、本キットによる対象株検出感度の評価を以下の手順に従い行った。
4.3×105～1.1×106 cfu/ml以上の濃度で検出可能であることが確認された（図1）。
なお、食品培養液のみから調製したテンプレートDNA（陰性コントロール）では非特異的バンドを含むいずれのバンドも確認されなかった（データ未掲載）。
食品培養液の準備：
牛挽肉25 gにノボビオシン加mEC培地225 gを加えてストマッカー処理し、42℃で22時間培養した。 接種用菌体の準備：
食品培養液950 μl と段階希釈した接種用菌体50 μlを混和した。
テンプレートDNA の準備：
結果：牛挽肉25 gにノボビオシン加mEC培地225 gを加えてストマッカー処理し、42℃で22時間培養した。 接種用菌体の準備：
7種類のO血清群に属する腸管出血性大腸菌（DNA濃度別の検出評価参照）をTSB培地で一晩培養（37℃）後、各菌液15 μlを新しいTSB 培地3 mlに接種してOD600＝0.8になるまで37℃で振とう培養した。TSB培地を用いて段階希釈系を作製し、直ちに各菌液100 μlを寒天平板培地へ接種して菌体濃度を推測した。
混和液の準備：食品培養液950 μl と段階希釈した接種用菌体50 μlを混和した。
テンプレートDNA の準備：
「腸管出血性大腸菌O26, O111及びO157の検査法について（食安監発0515第1号）」のアルカリ熱抽出法に従い、それぞれの混和液100 μlの遠心後沈査に50 mM NaOH 85 μlを添加して熱処理後、1 M Tris-HCl (pH7.0) 15 μlを加えて中和し、テンプレートDNA として用いた。
4.3×105～1.1×106 cfu/ml以上の濃度で検出可能であることが確認された（図1）。
なお、食品培養液のみから調製したテンプレートDNA（陰性コントロール）では非特異的バンドを含むいずれのバンドも確認されなかった（データ未掲載）。
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試験回数：全てにおいて1回
図1．食品汚染菌の検出評価
