Thermal Cycler Dice® Real Time System III、（II、およびLite：終売）を用いる場合の操作方法
TB Green Fast qPCR Mix（製品コード RR430S/A/B）
- 下記に示すPCR反応液を調製する。
＜1反応あたり＞ 試薬 使用量 最終濃度 TB Green Fast qPCR Mix（2×） 12.5 μl 1× PCR Forward Primer（10 μM） 1 μl 0.4 μM *1 PCR Reverse Primer（10 μM） 1 μl 0.4 μM *1 template（＜100 ng）*2 2 μl 滅菌精製水 8.5 μl total 25 μl *3 - 反応を開始する。
PCR反応は、下記のシャトルPCR標準プロトコールで行うことをお勧めします。
まずはこのプロトコールを試し、必要に応じてPCR条件を至適化してください。
Tm値が低めのプライマーなど、シャトルPCRでの反応が難しい場合には、3ステップPCRを行います。シャトルPCR標準プロトコール 
Holding（初期設定）
Cycle：1
95℃、30秒
2 Step PCR*4
Cycle：40
95℃、5秒
60℃、10秒
Dissociation※使用上の注意
本製品に使用している変異型Taq HSはポリメラーゼ活性を抑制する抗Taq抗体を利用したホットスタートPCR用酵素です。他社の化学修飾タイプのホットスタートPCR酵素で必要なPCR反応前の95℃（5～）15分の活性化ステップは行わないでください。必要以上の熱処理を加えると酵素活性が低下し、増幅効率、定量精度に影響を及ぼす傾向があります。
PCR反応前に鋳型の初期変性を行う場合でも、通常95℃ 30秒で充分です。 - 反応終了後、増幅曲線と融解曲線を確認し、定量を行う場合は検量線を作成する。
解析方法は、Thermal Cycler Dice Real Time System取扱説明書を参照してください。
