ユーザー様実施例：In-Fusion® Cloning Kitと他社同タイプキットの比較実施例
【実施内容】
In-Fusion HD Cloning Kitと他社同タイプキットを使用して、PCRにより線状化したベクター4,500 bpに3,800 bpのインサート断片のクローニングを行った。
反応時間は、 In-Fusion HD Cloning Kitは推奨の15分、他社同タイプキットは推奨である15～60分の中から、15分、50分のそれぞれで行った。
反応後、各条件で出現したコロニーの中から各6個ずつをピックアップし、コロニーPCRにより目的遺伝子の有無を確認した。
反応時間は、 In-Fusion HD Cloning Kitは推奨の15分、他社同タイプキットは推奨である15～60分の中から、15分、50分のそれぞれで行った。
反応後、各条件で出現したコロニーの中から各6個ずつをピックアップし、コロニーPCRにより目的遺伝子の有無を確認した。
【結果】
■出現した形質転換コロニー数
| In-Fusion HD Cloning | 他社キット | ||
|---|---|---|---|
| 反応条件 | 50℃、15分 | 50℃、15分 | 50℃、50分 |
| 出現したコロニー数 | 169 | 56 | 60 |
■目的クローンの割合
 | 出現したコロニー数は、In-Fusionキットの方が他社キットよりも多かった。
各反応条件において6個のコロニーをピックアップしてコロニーPCRで目的遺伝子を確認したところ、In-Fusionキットは100％の割合で目的クローンが得られたが、他社キットの目的クローンの取得率は50％以下だった。 【データご提供】 九州大学大学院医学研究院 応用幹細胞医科学部門 応用幹細胞医科学講座 浜崎様 |
