ユーザー様実施例：In-Fusion® Cloning Systemを用いたゲノム編集ノックイン用ドナーベクターの構築（3断片のマルチクローニング）
【実施内容】
In-Fusion HD Cloning Kitを用いて、3.0 kbのベクターにPuromycin耐性遺伝子カセット（2.5 kb）、CRISRP/Cas9切断部位のRightおよびLeft arm（それぞれ0.7/0.6 kb）の3断片のインサートDNAをクローニングした。図中の赤線で示す部位を制限酵素で切断してインサート確認を行った。
【結果】
X-Gal/IPTGによる青白選択より得られた多数のコロニーのうち10個の白色コロニーをピックアップして、制限酵素およびシーケンシングによりインサート確認を行ったところ、種類の異なるドナーベクター1および2においてそれぞれ9/10および7/10の高効率で目的のDNAコンストラクト（赤字番号のレーン）を得た。
M：1 kb DNA laddar Marker
【データご提供】
九州大学大学院医学研究院 がん分子病態学講座
飯森 真人様（助教）
新美 晋一郎様（研究員）
飯森 真人様（助教）
新美 晋一郎様（研究員）
