NucleoSpin^® DNA Stool

	試薬の調製	Buffer ST5＊1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
1.	サンプルの準備	180～220 mgのヒト糞便試料をMN Bead Tubes Type Aに加える。850 μlのBuffer ST1を加えて、2～3秒間水平方向に振って懸濁する。
2.	サンプルの溶解	Bead Tubeを70℃で5分間保温する。 Bead TubeをMN Bead Tube Holderにセットし、室温で10分間Vortex mixer上で振盪する。
3.	PCR阻害物の沈殿	Bead Tubeを13,000×g、3分間遠心して、上清600 μlを新しい2 mlのチューブ（各自で準備）に移す。沈殿物や浮遊物を吸わないように注意する。 Buffer ST2 100 μlを加えて、2～8℃で5分間インキュベートする。13,000×g、3分間遠心する。
4.	溶解液の濾過	NucleoSpin Inhibitor Removal ColumnをCollection Tube（2 ml：蓋付）にセットする。 3. の上清 550 μlをカラムに加え、13,000×g、1分間遠心する。
5.	Bufferの添加	カラムをとりはずし、Buffer ST3 200 μlを4. のろ液に加えて、vortexで混合する。
6.	カラムへの吸着	NucleoSpin DNA Stool ColumnをCollection Tube（2 ml：蓋付）にセットする。 5. の溶液700 μlをカラムに加え、13,000×g、1分間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じ2 mlのCollection Tubeにカラムをセットする。
7.	メンブレンの洗浄	1回目の洗浄 Buffer ST3 600 μlをカラムに添加し、13,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。 2回目の洗浄 Buffer ST4 550 μl をカラムに添加し、13,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。 3回目の洗浄 Buffer ST5 700 μl をカラムに添加し、蓋を閉めvortexで2秒間混合する。その後、13,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。 4回目の洗浄 Buffer ST5 700 μl をカラムに添加し、13,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
8.	メンブレンの乾燥	カラムをさらに13,000×gで2分間遠心する。 カラムをCollection Tubeのろ液に触れないよう取り出す。
9.	DNAの溶出	カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。 Buffer SE 30～100 μlを添加し、蓋を閉めて、13,000×gで1分間遠心し、DNAを溶出させる。溶出後にvortexで2秒間撹拌しておく。

*1 Buffer ST5の調製法
製品コード 740472.10（10回用）の場合：Wash Buffer ST5(Concentrate) 6 mlに96～100％エタノール 24 mlを添加する。
製品コード 740472.50（50回用）の場合の調製法は英文説明書を参照すること。

＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書を確認すること。