NucleoSnap^® cfDNA

大容量の血漿サンプルからの遊離DNA精製プロトコール（NucleoSnap cfDNA）

NucleoSnap cfDNA（製品コード 740300.10／740300.50）

1.	血漿サンプルの遠心	血漿サンプル^＊1を4,500×g、10分間遠心して、細胞やその残滓を除去する。
2.	サンプルの溶解	1. の血漿3 ml^＊1を50 mlチューブに移し、45 μlのProteinase Kを添加し、混合する。室温で5分間反応させたのち、Buffer VL 3 mlを加え、20秒間激しく混合する。 56℃で5分間インキュベートする。
3.	エタノールの添加	エタノール（96～100％）3 mlを^＊1添加し、10秒間激しく混合する。
4.	カラムへの吸着	NucleoSnap cfDNA ColumnをVacuum Manifoldにセットする。Column Conditioner CC 500 μlをカラムに添加し、0.4～0.6 barで液がカラムを通過するまで約30秒間吸引する。^＊2 3. の溶液をカラムに加え、約0.4 barで液がカラムを通過するまで5～15分間吸引する。通過後は吸引を止める。
5.	メンブレンの洗浄	1回目の洗浄 Buffer VW1 1 mlをカラムに添加し、0.2～0.4 barで液が通過するまで約1分間吸引する。通過後吸引を止める。 2回目の洗浄 Buffer WB 500 μlをカラムに添加し、0.2～0.4 barで液が通過するまで約30秒間吸引する。通過後吸引を止める。
6.	メンブレンの乾燥	5. のカラムをManifoldから取り外し、Collection Tube（2 ml：蓋なし）に装着し、カラムの上部コンテナ部分を取り外す。カラムを入れた2 mlのチューブを11,000～20,000×gで3分間遠心する。カラムをCollection Tubeのろ液に触れないよう取り出す。
7.	DNAの溶出	カラムを1.5 mlのCollection Tubeにセットする。 Elution Buffer 50 μlを添加し、3分間室温でインキュベートする。 11,000×gで1分間遠心し、DNAを溶出させる。

*1	血漿サンプルの容量使用する血漿量を変える場合には、血漿量に比例させてProteinase K、Buffer VL、エタノールの使用量を変える必要がある。 5 mlを超える血漿を使用する場合には、追加のProteinase K（製品コード 740396）、Buffer VL（製品コード 740833.200）が必要になる。

血漿量 [ml]	Proteinase K [μl]	Buffer VL [ml]	Ethanol [ml]
1	15	1	1
2	3	2	2
3	45	3	3
4	60	4	4
5	75	5	5
6	90	6	6
7	105	7	7
8	120	8	8
9	135	9	9
10	150	10	10

*2	カラムの平衡化は、3. の溶液をカラムに加える1～5分前に行う。

＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書を確認すること。

NucleoSnap^® cfDNA