DEF-CS培養システムとRNPを用いたゲノム編集によるCD81ノックアウト（KO）hiPSCクローンの取得
細胞回収・懸濁
（シングルセル化）
エレクトロポレーション
ゲノム編集iPSCプール
シングルセル
クローニング
ヒトiPS細胞（DEF-CS培養）
Cas9タンパク質
Guide-it Recombinant Cas9
(3 μg/μl)
sgRNA
Guide-it sgRNA in Vitro
Transcription Kitを用いた調製
Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) （製品コード 632641）とsgRNAより調製した複合体（RNP）をhiPSC（ChiPSC18株）にエレクトロポレーションにより導入した後、CD81 KO株をDEF-CS培養システムを用いてクローン化した（左図フロー）。得られたCD81 KO株のCD81、TRA1-60、SSEA4発現量をFACS解析で確認したところ、いずれのクローンでも高い未分化マーカー発現が確認された（上 or 右上グラフ）。
＊♯1 は片アリルのみのCD81 KO株
