NucleoSpin® DNA RapidLyse
動物組織からのゲノムDNA精製プロトコール(NucleoSpin® DNA RapidLyse(製品コード 740100.10/740100.50/740100.250))
使用時には、必ず添付の英文説明書をご確認ください。
試薬の調製 |
Buffer RLW*1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。 |
1. サンプルの溶解 |
2 mlのチューブに組織サンプル、Buffer RLY 150 μl、Proteinase K溶液10 μlを添加し、
56℃で撹拌しながら溶解する。
サンプルにより溶解時間は異なるため、目視で溶解が確認できるまでインキュベートする(最大1時間)。
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2. Bufferの添加 |
Buffer RLB 440 μlを添加し、よく混合する。
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3. カラムへの吸着 |
NucleoSpin DNA RapidLyse ColumnをCollection Tube (2 ml)にセットする。
2の溶液をカラムに添加し、11,000×g、1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、新しいCollection Tube(2 ml)にカラムをセットする。
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4. メンブレンの洗浄 |
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1回目の洗浄
Buffer RLW*1 500 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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2回目の洗浄
Buffer RLW*1 500 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨てた後、同じCollection Tubeにカラムをセットする。
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5. メンブレンの乾燥 |
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6. DNAの溶出 |
カラムを1.5 mlのマイクロチューブ(各自で用意)にセットする。
Buffer RLE 100 μl*2を添加する(添加後遠心前に室温で4分間インキュベートすることで収量を
増やすことも可能)。
11,000×gで1分間遠心し、DNAを溶出させる。
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NucleoSpin® DNA RapidLyse
製品コード 740100.10の場合:Wash Buffer RLW(concentrate)6 mlに、エタノール(96~100%)24 mlを添加する。
製品コード740100.50(50回用)、740100.250(250回用)の場合の調製法は英文説明書を参照すること。