NucleoSpin^® Plasmid Transfection-grade

大腸菌の培養液1～5 mlを11,000×gで30秒間遠心し、上清をできるだけ除去する。

細胞ペレットにBuffer A1（＋RNase A)^＊1250 μlを加え、ボルテックスまたはピペッテイングで完全に溶解する。
Buffer A2^＊3 250 μlを加え、チューブを6～8回反転して穏やかに混合する。ボルテックスはしてはならない。
2分間またはライセートが清澄化するまで室温で静置する。
Buffer A3 300 μlを加え、LyseControlの青色が完全に無色になるまでチューブを反転して穏やかに混合する。ボルテックスはしてはならない。

2.の溶液を遠心機の最高速度で、10分間室温で遠心する。上清が透明になるまで、この遠心を繰り返す。

NuleoSpin Plasmid TG ColumnをCollection Tube (2 ml)にセットする。
3.の上清をカラムに添加する。この時、大腸菌の残滓を持ち込まないように注意する。
11,000×gで1分間遠心する。
ろ液を捨て、カラムを同じCollection Tubeにセットする。

1回目の洗浄 Buffer ERB 700 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨て、カラムを同じCollection Tubeにセットする。
2回目の洗浄 Buffer AQ＊2 650 μlをカラムに添加し、11,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨て、カラムを同じCollection Tubeにセットする。 Collection Tubeからカラムの先がろ液に触れないように、カラムを注意深くはずす。

カラムをマイクロチューブ（1.5 ml：各自で用意）にセットする。
Buffer AE 50 μlを添加し、室温で1分間インキュベートした後、11,000×gで1分間遠心する。溶出液をプラスミド溶液として保存する。
Buffer AEの組成：5 mM Tris-HCl、pH8.5