NucleoSpin^® eDNA Water

環境水をろ過したfilterを5mlまたは15 mlのチューブに入れる。
Buffer DISSOLVE 2 mlを添加する。
Liquid Proteinase K 25 μlを加えて、vortexで10秒間混合する。
ロータリーシェーカーなどを用いて、filterがBufferに浸っている状態で緩やかに10分間攪拌する。

NucleoSpin Filter Midiを15 mlチューブ（各自で用意）にセットする。溶解液、filter、残渣などをすべてNucleoSpin Filter Midiに移す。
4,500×g、2分間遠心する。
NucleoSpin Filter Midiを取り除く。

Buffer ACID 360 μlを添加し、沈殿物が再懸濁されないように注意して一度だけ転倒混和する。
4,500×g、2分間遠心する。
上清を別の15 mlチューブに移す。

3の溶液にBuffer PRECを50 μl添加する。
NucleoTrap suspension 25 μlを加え、ロータリーシェーカーなどを用いて、室温で5分間混合する。
4,500×g、3分間遠心する。
上清を傾けて捨てる（またはピペットで取り除く）。

1回目の洗浄
Buffer RESU 400 μlをレジンに添加し、vortexで懸濁する。この懸濁液を1.5 mlチューブに移す。
10,000×g、1分間遠心する。
上清を捨てる。

2回目の洗浄
Buffer WB 400 μlをレジンに添加し、vortexで懸濁する。
10,000×gで1分間遠心する。
上清を捨てる。

3回目の洗浄
Buffer WB 300 μlをレジンに添加し、vortexで懸濁する。
2 mlチューブにセットしたNucleoSpin eDNA XS columnにこの懸濁液を移す。
10,000×gで2分間遠心する。
ろ液を捨てた後、新しい1.5 mlチューブ（各自で用意）にカラムをセットする。

Buffer BE 100 μlを添加し、蓋を閉めて、5～10秒間vortexで混合し、レジンを懸濁させる。
室温で1分間静置する。
10,000×gで1分間遠心し、DNAを溶出させる。