IVTで合成したmRNAの収量、および細胞へのmRNAトランスフェクション
A．CleanCap Reagent AG (3’ OMe)使用時のRNA収量
| ＜方法＞ | CleanCap Reagent AG (3’ OMe) 有無のIVT反応液で、FLuc mRNAを合成しました。 |
| ＜結果＞ | CleanCapの使用によるRNA収量への影響はほとんど認められませんでした。 |
B．CleanCap Reagent AG (3’ OMe)を用いて合成されたFLuc mRNAのHEK293T細胞での発現
| ＜方法＞ | A で得られたRNAの0.5 μgをTransIT-mRNA Transfection Kit（製品コード MIR2225/MIR2250/MIR2255/MIR2256）を用いてHEK293T細胞にトランスフェクションしました。 |
| ＜結果＞ | 24時間後の細胞を回収し、FLucの活性を測定したところ、CleanCap有りのIVT反応液で合成されたFLuc mRNAでは、市販のFLuc mRNA positive controlと同等の活性を確認しました。一方、CleanCap無しのIVT反応液で合成されたFLuc RNAでは、活性はほぼ認められませんでした。このことは、RNAによるタンパク質の発現にCap付加が不可欠であることを示しています。 |
