IVTで合成したRNAの回収方法の比較（収量および性質の比較）
A．LiCl沈殿法とスピンカラム法によるRNA簡易精製
| ＜方法＞ | CleanCap Reagent AG (3’ OMe) およびN1-メチルシュードUTPを含むIVT反応でFLuc mRNAを合成し、LiCl沈殿法もしくはスピンカラム法により簡易精製しました。 |
| ＜結果＞ | LiCl沈殿法と比べスピンカラム法で溶出を1回実施した場合は、得られるRNA量は低くなりましたが、溶出を2回実施（50 μl×2）することでLiCl沈殿法と同程度の収量でした。スピンカラム法においては、溶出は2回実施することを強く推奨します。 |
B．簡易精製法により得られたFLuc mRNAのHEK293T細胞での発現
| ＜方法＞ | A で得られたRNAの0.5 μgを、TransIT-mRNA Transfection Kitを用いてHEK293T細胞にトランスフェクションしました。 |
| ＜結果＞ | 24時間後の細胞を回収し、FLucの活性を測定したところ、どちらも市販のFLuc mRNA positive controlと同等以上の活性を確認しました。 |
