動物の血清・血漿、ミルク、無細胞体液からの核酸精製プロトコール
| 試薬の準備 | Buffer SVW2*1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認します。 また、Carrier RNA*2がRNase-free H2Oで溶解されていることを確認します。 RNase-free H2Oを70℃に予温しておきます。 | |
| 1. | サンプルの溶解 |
 Liquid Proteinase K 10 μlをCollection Tube（1.5 ml）に分注し、試料200 μlを加えて緩やかに混合します。 Buffer SVL 200 μlを加え、振盪機を用いて1,400 rpmで室温10分間混合します。 スピンダウンを行い、2.5 μlのCarrier RNA溶液を加えます。Vortexなどで混合した後、3分間室温で静置します。 |
|---|---|---|
| 2. | エタノールの添加 |
 1．の溶液をスピンダウンした後、200 μlのエタノール（96～100％）を加えて素早く混合します。 室温で5分静置します。 スピンダウンして溶液を落とします。 |
| 3. | カラムへの吸着 |
 NucleoSpin VET Columnを2 ml Collection Tubeにセットします。
2．の溶液610 μlをカラムに添加し、4,000×g、3分間遠心します*3。 ろ液を捨てた後、新しい2 ml Collection Tubeにカラムをセットします。  |
| 4. | メンブレンの洗浄と乾燥 |
1回目の洗浄
Buffer SVW1 400 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心します。 ろ液を捨てた後、新しい2 ml Collection Tubeにカラムをセットします。
2回目の洗浄
Buffer SVW2 400 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心します。 ろ液を捨てた後、新しい2 ml Collection Tubeにカラムをセットします。 3回目の洗浄
Buffer SVW2 200 μlをカラムに添加し、20,000×gで5分間遠心します。 ろ液を捨てた後、新しい1.5 ml Collection Tubeにカラムをセットします。 蓋を開けて56℃で5分間乾燥させます。 |
| 5. | 核酸の溶出 |
 70℃に予温したRNase-free H2O 100 μlを添加し、3分間室温で静置します。 20,000×gで3分間遠心し、核酸を溶出させます。 |
＊1 Buffer SVW2の調製法
740842.10の場合はWash Buffer SVW2 (Concentrate) 6 mlに96～100％エタノール 24 mlを添加します。
製品コード 740842.50、740842.250の場合の調製法は英文説明書を参照してください。
740842.10の場合はWash Buffer SVW2 (Concentrate) 6 mlに96～100％エタノール 24 mlを添加します。
製品コード 740842.50、740842.250の場合の調製法は英文説明書を参照してください。
＊2 Carrier RNA溶液の調製法
Carrier RNA のチューブにRNase-free H2O 3 mlを加えて溶解させます。使用時まで－20℃で保存します。
Carrier RNA のチューブにRNase-free H2O 3 mlを加えて溶解させます。使用時まで－20℃で保存します。
＊3 この条件でカラム内に溶液が残っている場合は、15,000～20,800×gで1分間遠心します。それでも残っている場合は試料の量や状態を確認する方が望ましい。
＜注意＞
使用時には、詳細を必ず添付の英文説明書で確認してください。
