NucleoSpin^® VET

様々な乾式スワブを使用することが可能です。

Buffer SVW2^*1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認します。
また、Carrier RNA^*2がRNase-free H₂Oで溶解されていることを確認します。
RNase-free H₂Oを70℃に予温しておきます。
PBSを用意します。

2 mlのチューブ（各自で用意）にPBS 400 μlを分注します。
試料を採取したスワブをPBSにつけます。
室温で30分間、チューブを振盪します。
スワブを取り出します。
2,000×gで1分間遠心して残渣を除去します（回転数や時間を延ばさないでください）。
上清200 μlをCollection Tube（1.5 ml）に移します。
Liquid Proteinase K 10 μlを加えて緩やかに混合します。
Buffer SVL 200 μlを加え、振盪機を用いて1,400 rpmで室温10分間混合します。
スピンダウンを行い、2.5 μlのCarrier RNA溶液を加えます。Vortexなどで混合した後、3分間室温で静置します。

1の溶液をスピンダウンした後、200 μlのエタノール（96～100％）を加えて素早く混合します。
室温で5分間静置します。
スピンダウンして溶液を落します。

NucleoSpin VET Columnを2 ml Collection Tubeにセットします。
2．の溶液610 μlをカラムに添加し、4,000×g、3分間遠心します^*3。
ろ液を捨てた後、新しい2 ml Collection Tubeにカラムをセットします。

70℃に予温したRNase-free H₂O 100 μlを添加し、3分間室温で静置します。
20,000×gで3分間遠心し、核酸を溶出します。