NucleoSpin^® VET

NucleoProtect VET Blood Tubeを用いて採取・保存された試料およびNucleoProtect VET Reagentを用いて保存された血液試料について使用可能です。

Buffer SVW2^*1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認します。
また、Carrier RNA^*2がRNase-free H₂Oで溶解されていることを確認します。
RNase-free H₂Oを70℃に予温しておきます。
Buffer PFN（製品コード 740121.5）を用意しておきます。

NucleoProtect VETで保存された血液試料を30秒間vortexで混合します。スピンダウンした後200 μlの溶液を取り出し、Collection Tube（1.5 ml）に移します。
Buffer SVL 100 μl、水 100 μl、Buffer PFN 2 μlを添加します（これらはあらかじめ混合しておいてもよい）。10～15秒間vortexで混合します。
スピンダウンを行ってLiquid Proteinase K 10 μlを添加し、緩やかに混合します。
振盪機を用いて1,400 rpmで室温10分間混合します。
スピンダウンを行い、2.5 μlのCarrier RNA溶液を加えます。Vortexなどで混合した後、3分間室温で静置します。

1．の溶液をスピンダウンした後、200 μlのエタノール（96～100％）を加えて素早く混合します。
室温で5分静置します。
スピンダウンして溶液を落します。

NucleoSpin VET Columnを2 ml Collection Tubeにセットします。
2．の溶液610 μlをカラムに添加し、4,000×g、3分間遠心します^*3。
ろ液を捨てた後、新しい2 ml Collection Tubeにカラムをセットします。

70℃に予温したRNase-free H₂O 100 μlを添加し、3分間室温で静置します。
20,000×gで3分間遠心し、核酸を溶出させます。