Easy Directシリーズ(RNA検出用)

PCR阻害物質に対する阻害耐性比較

<対象製品>
Directタイプ:One Step Easy Direct RT-qPCR Kit (Non-treatment)(製品コード RC805S/A)
室温処理タイプ:One Step Easy Direct RT-qPCR Kit (Non-heat-treatment) (製品コード RC801S/A)
熱処理タイプ:One Step Easy Direct RT-qPCR Kit (Heat-treatment) (製品コード RC803S/A)

様々なPCR反応阻害物質に対するEasy Directシリーズ製品の耐性を比較した。阻害物質は各前処理試薬にて処理したのち(Directタイプは前処理なし)、一定量の鋳型RNAとともに反応に供した。
その結果、各製品の阻害物質に対する耐性は阻害物質の種類によって傾向が異なり、同一のRT-qPCR試薬を用いる室温処理タイプと熱処理タイプの阻害耐性はほぼ同等であることが示された。

【Directタイプの方が高い阻害耐性を示す物質】
  • ヘマチン
    ヘマチン

  • フミン酸
    フミン酸

【室温処理/熱処理タイプの方が高い阻害耐性を示す物質】
  • グアニジンチオシアン酸塩
    グアニジンチオシアン酸塩

  • ヘパリン
    ヘパリン

  • メラニン
    メラニン

<試験条件>
検出系:Human ACTB遺伝子検出用Primer/Probe
鋳型RNA:HL60 total RNA
リアルタイムPCR装置:Thermal Cycler Dice Real Time System III(製品コード TP950)

リアルタイムPCR条件:
RC805S/A
90℃3 min.
60℃
95℃
60℃
5 min.
5 sec.
30 sec.
 
45 cycles

RC801S/A、RC803S/A
52℃5 min.
95℃
95℃
60℃
10 sec.
5 sec.
30 sec.
 
45 cycles

  Easy Directシリーズ(RNA検出用)