Easy Directシリーズ（RNA検出用）

「第12回猫の集会^＊」にて発表した内容を齊藤暁（宮崎大学 フロンティア科学総合研究センター）様のご厚意により、掲載の許諾をいただいております。

対象製品：One Step Easy Direct RT-qPCR Kit (Non-treatment)（製品コード RC805A）
目的：ネコの重症熱性血小板減少症候群（SFTS：Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome）治療薬開発における、SFTSウイルスに対する阻害作用を有する薬剤の同定
検体種：ウイルス感染細胞（ネコ単球由来細胞株）の培養上清
検出ターゲット・検出対象遺伝子：SFTSウイルスのS遺伝子
使用した装置：QuantStudio 5 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）

方法：
約2,000種類の薬剤からなるライブラリーをスクリーニングに用いた。ネコ単球由来細胞株にSFTSウイルスを感染させ、感染2時間後から薬剤で処理した。薬剤は1 μMの固定濃度で評価を行った（n＝2）。抗ウイルス効果は感染4日後にリアルタイムPCRによる培養上清中ウイルスゲノムRNAの定量で判定した。なお、反応組成、反応条件は取扱説明書に準じ、一部条件を調整して実施した。

結果：
約2,000薬剤のうち約20種類がSFTSウイルスの増殖を20％未満に抑制した（一部薬剤での結果を下図に示す）。また、第1スクリーニングで抑制効果が示唆された薬剤について第2スクリーニングを行い、うち8種類で再現性および濃度依存性が確認された（データ割愛）。
最終的に、薬剤特性などを考慮し、4種類を候補薬剤として選定することに成功した。


※Favipiravir: 陽性コントロール。SFTSウイルスに抗ウイルス効果を示すことが報告されている。
DMSO：陰性コントロール

製品に関するコメント：
約2,000種類の薬剤についてn＝2でスクリーニングを行ったため、サンプルだけで4,000ウェル、陽性コントロール、陰性コントロールを含めると96ウェルプレートで50枚以上の測定が必要だったため、本試薬を使用することで大幅な時間短縮に繋がった。特に、duplicate間のバラつきが小さく、精確な結果を得られたことで効率よくスクリーニングを進めることができた。

注意事項：
本ページは、弊社製品の研究用途での実施例を紹介するものであり、ヒト、動物への医療、臨床診断を目的とするものではありません。
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