豚熱ウイルス・アフリカ豚熱ウイルス検出試薬

血清・臓器乳剤からの核酸精製プロトコール

NucleoSpin Virus（製品コード 740983.10/.50/.250）
以下リンク先をご参照ください。使用時には、取扱説明書もあわせてご確認ください。
　血漿・血清からのウイルス核酸精製プロトコール

※NucleoSpin RNAの標準プロトコールにある「DNase処理」工程を省略し、以下のプロトコールで実施します。
使用時には、取扱説明書もあわせてご確認ください。

試薬の準備

Buffer RA3^＊が添付の英文説明書に従って調製されていることを確認する。

サンプルの準備

臓器乳剤（10％乳剤遠心上清）100 μlを準備する。

サンプルの溶解

Buffer RA1 350 μlおよび2-メルカプトエタノール 3.5 μl（終濃度10～20 mMのDTT
またはTCEPでも可）を1の臓器乳剤に添加し、均一になるまでボルテックスで激しく攪拌する。

ライセートのろ過

NucleoSpin Filter（紫のリング）をCollection Tube（2 ml）にセットする。
2のライセートをNucleoSpin Filterに添加し、11,000×gで1分間遠心する。

エタノールの添加

NucleoSpin Filterを取り除き、ろ液に70％エタノール350 μlを添加し、よく混合する。
（スピンダウンは避ける。スピンダウンした場合は沈殿物も全て5のカラムに添加する。）

カラムへの吸着

NucleoSpin RNA Column（水色のリング）を用意する。
4の溶液をカラムに添加し、11,000×g、30秒間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。

メンブレンの洗浄

	1回目の洗浄 Buffer RAW2 200 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。カラムを新しいCollection Tube（2 ml）にセットする。
	2回目の洗浄 Buffer RA3^＊700 μlをカラムに添加し、11,000×gで30秒間遠心する。ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにセットする。
	3回目の洗浄 Buffer RA3^＊250 μlをカラムに添加し、11,000×gで2分間遠心する。カラムを新しいCollection Tube（1.5 ml）にセットする。

溶液の洗浄

RNase-free H₂O 60 μlをカラムに加え、11,000×gで1分間遠心する。
溶出した核酸溶液は、－20℃または－70℃で保存する。

＊ Buffer RA3
製品コード 740955.10（10回用）の場合：Wash Buffer RA3(Concentrate) 6 mlに96～100％エタノール 24 mlを添加する。

＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書を確認すること。