特殊細菌検出用 Positive Control Template

特殊細菌検出用Positive Control Templateを用いた実験例を示す。

専用10 × PCR Buffer*	5 μl
dNTP Mixture（各2.5 mM）	4 μl
Primer-1	0.5 μl
Primer-2	0.5 μl
Positive Control Template	0.5 μl
TaKaRa Taq（5 U/μl）	0.25 μl
滅菌水	39.25 μl
Total	50 μl

反応液は氷冷下で調製する。
* 特殊細菌検出用Primer Set（TaKaRa Code No. S001～S028）に添付している。

熱変性	94℃、1 min
アニーリング	55℃、1 min	35 cycles
伸長	72℃、1 min

各Positive Control Templateより得られる増幅産物は、レーン1とほぼ同じ位置に泳動されるので、各種病原菌ゲノムより得られる増幅産物とサイズにより区別することができる。

ゲル：3% NuSieve 3：1 Agarose（エチジウムブロマイド含）
図1 Positive Control Templateの増幅産物と各種病原菌ゲノムの増幅産物との泳動パターンの比較

Lane1,16	：	Positive Control Template SE2に対するSEZ primerによる増幅DNA (697 bp) Lane 2以下は各種病原菌の熱抽出物をテンプレートとして使用した。
Lane 2	：	VPD　Primerによる増幅DNA（251 bp）
Lane 3	：	VPS　Primerによる増幅DNA（210 bp）
Lane 4	：	ELT　Primerによる増幅DNA（263 bp）
Lane 5	：	ESH　Primerによる増幅DNA（131 bp）
Lane 6	：	ESP　Primerによる増幅DNA（123 bp）
Lane 7	：	EVT　Primerによる増幅DNA（349 bp）
Lane 8	：	EVS　Primerによる増幅DNA（404 bp）
Lane 9	：	EVC　Primerによる増幅DNA（171 bp）
Lane10	：	SEA　Primerによる増幅DNA（423 bp）
Lane11	：	SEB　Primerによる増幅DNA（391 bp）
Lane12	：	SEZ　Primerによる増幅DNA（146 bp）
Lane13	：	SED　Primerによる増幅DNA（499 bp）
Lane14	：	SEE　Primerによる増幅DNA（557 bp）
Lane15	：	VCT　Primerによる増幅DNA（307 bp）
Lane17	：	TST　Primerによる増幅DNA（228 bp）
Lane18	：	INV　Primerによる増幅DNA（293 bp）
Lane19	：	IPA　Primerによる増幅DNA（242bp）
Lane M	：	pHY Marker

ゲル：3% NuSieve 3：1 Agarose（エチジウムブロマイド含）
図2 Positive Control Templateの増幅産物と各種病原菌ゲノムの増幅産物との泳動パターンの比較

Lane 1	：	Positive Control Template SNに対するSIN primerによる増幅DNA (689 bp) Lane 2以下は各種病原菌の熱抽出物をテンプレートとして使用した。
Lane 2	：	SIN　Primerによる増幅DNA（378 bp）
Lane 3	：	STN　Primerによる増幅DNA（264 bp）
Lane 4	：	CPE　Primerによる増幅DNA（456 bp）
Lane 5	：	BAS　Primerによる増幅DNA（284 bp）
Lane 6	：	BBS　Primerによる増幅DNA（314 bp）
Lane 7	：	BCS　Primerによる増幅DNA（290 bp）
Lane 8	：	BDS　Primerによる増幅DNA（497 bp）
Lane 9	：	BES　Primerによる増幅DNA（266 bp）
Lane10	：	BFS　Primerによる増幅DNA（332 bp）
Lane11	：	BGS　Primerによる増幅DNA（488 bp）
Lane12	：	VPR　Primerによる増幅DNA（250 bp）
Lane M	：	pHY Marker