BcaBEST™ RNA PCR Kit Ver. 1.1

ヒト培養細胞HL60株由来total RNAを鋳型としたRT-PCR

■ 方法

鋳   型:ヒト培養細胞HL60株由来total RNA
増幅サイズ:約 1 kb、約 2 kb、約 4.4 kb
ターゲット:トランスフェリンレセプター

逆転写反応液の調製
試薬使用量
Bca 1st Buffer10 μl
MgSO4(25 mM)4 μl
dNTP Mixture(10 mM)1 μl
RNase Inhibitor 0.5 μl
BcaBEST Polymerase1 μl
Oligo dT Primer1 μl
HL60由来 total RNA(1μg/μl)1 μl
RNase Free dH2O1.5 μl
Total20 μl
逆転写反応条件
65℃1 min1 cycle
30℃5 min
↓gradient15 min
65℃30 min
98℃ 5 min
5℃5 min
PCR反応
試薬使用量
逆転写反応液20 μl
MgSO4(25 mM)6 μl
Bca 2nd Buffer16 μl
Bca-Optimized Taq0.5 μl
上流プライマー(20 μM)1 μl
下流プライマー(20 μM)1 μl
滅菌精製水1 μl
RNase Free dH2O55.5 μl
Total100 μl
PCR反応条件
94℃30 sec30 cycles
55℃30 sec
72℃5 min

■ 結果

電気泳動像

1% Agarose gel
8 μl/泳動
Lane
M:λ-Hind III digest 1:約 1 kb
2:約 2 kb
3:約 4.4 kb

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