TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice®

One Step RT-PCR

One Step RNA PCR Kit(製品コード RR024A)を用いて、TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice(製品コード TP600)とTaKaRa PCR Thermal Cycler SP(製品コード TP400)とで反応性を比較した。以下の組成にて、AMV RTase XL存在下(RTase(+))、非存在下(RTase(-))で反応性を比較した。

反応液組成

10×One Step RNA PCR Buffer5 μl
25 mM MgCl210 μl
dNTP Mixture (10 mM each)5 μl
RNase inhibitor(40 U/μl)1 μl
AMV RTase XL (5 U/μl) or DEPC処理水1 μl
AMV Optimized Taq(5 U/μl)1 μl
Control F-1 Primer 1 (20μM)1 μl
Control R-1 Primer 2 (20μM)1 μl
Positive Control RNA1 μl
RNase Free H2O24 μl

Total volume50 μl

PCR条件

50℃15 min(RT反応)
94℃2 min(RTaseの不活化)
94℃30 sec
│ 30 cycles
60℃30 sec
72℃1.5 min

結果

Dice(TP600) SP(TP400)
 M   1   2  M   1   2  Lane Sample
 1 RTase(-)
 2 RTase(+)
 M 100 bp DNA Ladder

反応終了後、反応液の一部をアガロースゲル電気泳動を行い、RTase(+)の場合のみコントロール反応産物462 bpが検出された。また、TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice(製品コード TP600)はTaKaRa PCR Thermal Cycler SPと同等以上の反応性を示した。

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