鋳型量の許容範囲の検討（2ステップRT-PCR）
PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit（製品コード R023A）
【方法】
HL60細胞由来のtotal RNA（100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、200 ng、500 ng、1 μg、2 μg、3 μg、4 μg、5 μg、6 μg）を鋳型として用い、本キットのプロトコールにより Oligo dT Primer を用いた逆転写反応を行った。
その一部（5 μl）をPCRに使用し、トランスフェリンレセプター（TFR）4 kbを増幅した。
その一部（5 μl）をPCRに使用し、トランスフェリンレセプター（TFR）4 kbを増幅した。
| PCR条件：98℃ | 10 sec. | 30 cycles | ||
| 55℃ | 15 sec. | |||
| 68℃ | 4 min. |
【結果】
| 鋳型量（50 μl PCR 反応系） | |||
| 1 | ： | total RNA 25 pg 相当 | |
| 2 | ： | total RNA 250 pg 相当 | |
| 3 | ： | total RNA 2.5 ng 相当 | |
| 4 | ： | total RNA 25 ng 相当 | |
| 5 | ： | total RNA 50 ng 相当 | |
| 6 | ： | total RNA 125 ng 相当 | |
| 7 | ： | total RNA 250 ng 相当 | |
| 8 | ： | total RNA 500 ng 相当 | |
| 9 | ： | total RNA 750 ng 相当 | |
| 10 | ： | total RNA 1 μg 相当 | |
| 11 | ： | total RNA 1.25 μg 相当 | |
| 12 | ： | total RNA 1.5 μg 相当 | |
| M | ： | λ-Hind III digest | |
RT反応時のtotal RNA量を6 μg/20 μlまで増やしても、問題なく良好なTFR遺伝子の増幅が確認できた。
