エンハンサー機能の確認（pUC系ベクターを使用した一過性発現確認）
pRI 101シリーズ（製品コード 3262、3263）
方法
タバコ培養細胞BY-2、シロイヌナズナ培養細胞T87およびイネ（Oryza sativa）のプロトプラストを調製し、エレクトロポレーション法により下図に示すβ-グルクロニダーゼ（GUS）遺伝子配列を持つプラスミドを導入した。プラスミド導入後、16～18時間培養した後にプロトプラストを破砕し、得られた抽出液中に含まれるGUS活性を測定した。GUS活性は、基質である4-メチルウンベリフェリル-β-Ｄ-グルクロニド（4-MUG）が分解されて生ずる4-メチルウンベリフェロン（4MU）量を蛍光強度を指標にして測定した。
結果
5'非翻訳領域（5'-UTR）を付与したプラスミドを用いた場合、CaMV 35Sプロモーター単独の場合に比べて、数10倍以上のGUS活性を示した。シロイヌナズナADH 5'-UTRは BY-2細胞、T87細胞では高い活性を示すが、イネではほとんど効果はなかった。一方、イネADH 5'-UTRはBY-2細胞、T87細胞に加え、イネのプロトプラストでも効果を示した。
