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アプリケーションノート
PCR
マウス尾からのDNA抽出&PCR増幅
PCR
マウス尾からのDNA抽出&PCR増幅
1. 抽出液使用量の影響
【方法】
マウス尾の先端 約2 mmから操作方法に従ってDNAを抽出した。遠心後の上清(抽出液)の一部を50 μl PCR反応系に添加し、マウス
Ywhaz
遺伝子のPCR増幅(約1 kb)を行った。各PCR反応液4 μlを添付の5×Loading Dyeと混合し電気泳動に供した。
【結果】
各抽出液使用量で、目的遺伝子を良好に増幅できた。
PCR条件:
98℃
2 min.
↓
98℃
10 sec.
30 cycles
60℃
15 sec.
68℃
1 min.
【PCR反応に使用した抽出液量】
レーン1.
抽出液1 μl(PCR反応液の1/50量)
レーン2.
抽出液2.5 μl(PCR反応液の1/20量)
レーン3.
抽出液5 μl(PCR反応液の1/10量)
*
レーンM.
250 bp DNA Ladder
*
本キットでは、抽出液のPCR反応液への持ち込み量は反応液の1/20量以下を推奨している。
2. 複数サンプルの反応性比較
【方法】
8匹のマウス尾の先端約1 mmから同時に、操作方法に従ってDNAを抽出した。遠心後の上清2.5 μlを50 μl PCR反応系に添加し、1.と同様のPCR条件(サイクル数のみ変更)でマウス
Ywhaz
遺伝子のPCR増幅(約1 kb)を行った。各PCR反応液4 μlを添付の5×Loading Dyeと混合し電気泳動に供した。
【結果】
すべてのマウス尾の試料から、目的遺伝子を良好に増幅できた。
30 Cycles
35 Cycles
M: 250 bp DNA Ladder
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