他社AAV2ベクター精製キットとの性能比較
AAVpro™ Purification Kit（AAV2）（製品コード 6232）
AAVpro Helper Free System (AAV2)（製品コード 6230）を使用してT225フラスコ5枚に調製した蛍光タンパク質ZsGreen1を搭載するAAV2ベクター産生細胞から、AAVpro Purification Kit（AAV2）（製品コード 6232）および他社のAAV2ベクター精製キット（A社、B社）を用いてAAV2ベクターの精製を行い、性能を比較した。
【AAV2ベクター収量評価】
各キットにより得られた精製AAV2ベクター量をAAVpro Titration Kit (for Real Time PCR)（製品コード 6233）を使用して、リアルタイムPCRにより定量した（図1）。AAVpro Purification Kit（AAV2）では、他社精製キットと比較して3倍以上の高い収量が得られた。
図1. 各キットを用いて精製したAAV2ベクター収量
【精製度評価】
精製AAV2ベクターを1レーンあたり1×109 vector genome（vg）でSDS-PAGEに供し、精製度を評価した（図2）。その結果、AAVpro Purification Kit（AAV2）で精製したAAV2ベクターは、他社キットで精製したものと比較して、AAV2構成タンパク質以外のバンドが確認されず、最も精製度が高いことが示された。
図2. 各キットを用いて精製したAAV2ベクターのSDS-PAGE
【HT1080細胞への感染能評価】
精製したAAV2ベクターのHT1080細胞への感染力価を評価した（図3）。精製したAAV2ベクターはいずれも2,500 vg/cellで感染させ、3日後にフローサイトメトリー解析を行った。その結果、AAVpro Purification Kit (AAV2)で精製したAAV2ベクターは、他社キットで精製したものと比較して最も高い導入率を示した。
図3. 各キットを用いて精製したAAV2ベクターのHT1080細胞への感染力価
【AAV2ベクター収量評価】
各キットにより得られた精製AAV2ベクター量をAAVpro Titration Kit (for Real Time PCR)（製品コード 6233）を使用して、リアルタイムPCRにより定量した（図1）。AAVpro Purification Kit（AAV2）では、他社精製キットと比較して3倍以上の高い収量が得られた。
図1. 各キットを用いて精製したAAV2ベクター収量
【精製度評価】
精製AAV2ベクターを1レーンあたり1×109 vector genome（vg）でSDS-PAGEに供し、精製度を評価した（図2）。その結果、AAVpro Purification Kit（AAV2）で精製したAAV2ベクターは、他社キットで精製したものと比較して、AAV2構成タンパク質以外のバンドが確認されず、最も精製度が高いことが示された。
 |
APK： AAVpro Purification Kit（AAV2） A： A社AAV2精製キット B： B社AAV2精製キット |
【HT1080細胞への感染能評価】
精製したAAV2ベクターのHT1080細胞への感染力価を評価した（図3）。精製したAAV2ベクターはいずれも2,500 vg/cellで感染させ、3日後にフローサイトメトリー解析を行った。その結果、AAVpro Purification Kit (AAV2)で精製したAAV2ベクターは、他社キットで精製したものと比較して最も高い導入率を示した。
図3. 各キットを用いて精製したAAV2ベクターのHT1080細胞への感染力価
