蛍光タンパク質（AcGFP1）の発現
pHEK293 Ultra Expression Vector I／II（製品コード 3390/3392）
接着性HEK293T細胞
あらかじめ12ウェル細胞培養用プレートに培養しておいたHEK293T/17細胞に、TransIT-293 Transfection Reagent（製品コード MIR2704～2706）を使用して、キットのプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。各実験で使用したプラスミドを表に示した。
浮遊性HEK293細胞
あらかじめ125 ml三角フラスコに培養しておいた浮遊性HEK293細胞（Free Style 293-F cells、Thermo Fisher Scientific社製）に、キットのプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。各実験で使用したプラスミドを表に示した。
表
| 細胞 | AcGFP1 発現ベクター | pHEK293 Enhancer Vector | ||
| プラスミドの種類 | プラスミド量 （μg） | プラスミド量 （μg） | ||
| 1 2 3 4 5 | 接着性 HEK293T細胞 | pBApo-CMV/AcGFP1 Vector I/AcGFP1 Vector II/AcGFP1 Vector II/AcGFP1 A 社Vector/AcGFP1 | 1 1 1 1 1 | - - 0.008 0.2 - |
| 6 7 8 9 10 | 浮遊性 HEK293細胞 | pBApo-CMV/AcGFP1 Vector I/AcGFP1 Vector II/AcGFP1 Vector II/AcGFP1 A 社Vector/AcGFP1 | 30 30 30 30 30 | - - 0.24 6 - |
| pBApo-CMV | ： | pBApo-CMV DNA（製品コード 3242） |
| Vector I | ： | pHEK293 Ultra Expression Vector I（製品コード 3390） |
| Vector II | ： | pHEK293 Ultra Expression Vector II（製品コード 3392） |
| A社Vector | ： | A社タンパク質高発現ベクター |
トランフェクションから2日後、顕微鏡観察（接着性HEK293T細胞のみ）およびフローサイトメーターで蛍光強度の観察を行った。結果を図1及び図2に示した。
その結果、本製品を用いることで一般的なCMVプロモータを利用した発現ベクター（pBApo-CMV DNA）と比較して5～11倍、A社製ベクターと比較して2～7倍の蛍光強度の増加が認められた。
本製品を用いた試験では、肉眼でも培地が緑色になることを確認できた（図3）。
細胞を回収し、細胞ライセートを電気泳動後CBB染色したところ、くっきりとAcGFPのバンドを確認できた（図4）。
図1．蛍光顕微鏡画像
その結果、本製品を用いることで一般的なCMVプロモータを利用した発現ベクター（pBApo-CMV DNA）と比較して5～11倍、A社製ベクターと比較して2～7倍の蛍光強度の増加が認められた。
本製品を用いた試験では、肉眼でも培地が緑色になることを確認できた（図3）。
細胞を回収し、細胞ライセートを電気泳動後CBB染色したところ、くっきりとAcGFPのバンドを確認できた（図4）。
図1．蛍光顕微鏡画像
 接着細胞（293T／17） |  浮遊細胞（FreeStyle 293-F Cells） |
図2．AcGFP陽性細胞の蛍光強度
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[接着性HEK293T細胞]
1．pBApo-CMV/AcGFP1（1 μg）
2．Vector I/AcGFP1（1 μg） 3．Vector II/AcGFP1（1 μg）＋Enhancer Vector（0.008 μg） 4．Vector II/AcGFP1（1 μg）＋Enhancer Vector（0.2 μg） 5．A 社Vector/AcGFP1（1 μg） [浮遊性HEK293細胞]
6．pBApo-CMV/AcGFP1（30 μg）
7．Vector I/AcGFP1（30 μg） 8．Vector II/AcGFP1（30 μg）＋Enhancer Vector（0.24 μg） 9．Vector II/AcGFP1（30 μg）＋Enhancer Vector（6 μg） 10．A社Vector/AcGFP1（30 μg） |
 図3．培養フラスコ写真（浮遊性HEK293細胞） |
 図4．電気泳動・CBB染色結果 |
